The chronicle of the ups and downs that made Bacillus thuringiensis a natural insecticide

Bacillus thuringiensis is a worldwide known bacterium for its capacity to control insect pests thanks to the action of its parasporal crystal. The objective of this paper deals with the history, in some cases unknown, of the study of Bacillus thuringiensis that led it to be a crucial biological alternative in controlling pest insects. How the mode of action for killing insects was understood, as well as the field tests that were carried out to evaluate its effectiveness and to develop the first commercial products, are reflected in this review that presents and discusses the scientific successes and failures that marked the course of B. thuringiensis.

Bacillus thuringiensis es una bacteria conocida mundialmente por su capacidad para controlar insectos plaga, gracias a la acción de su cristal parasporal. El objetivo de esta revisión trata de la historia, en algunos casos desconocida, del estudio de Bacillus thuringiensis que la llevó a ser una importante alternativa biológica en el control de insectos plaga. Cómo se llegó a comprender el modo de acción para matar insectos, así como las pruebas de campo que se realizaron para evaluar su efectividad y lograr desarrollar los primeros productos comerciales están plasmados en esta revisión que presenta y discute los aciertos y desaciertos científicos que marcaron el rumbo de B. thuringiensis.

Anti-endotoxin antibodies consumption in cardiovascular collapse: Pathophysiological concerns / Consumo de anticuerpos antiendotoxina en el shock: relación etiológica

Objective Abnormal endotoxin activity in critically ill patients has been described in the absence of Gram-negative bacterial (GNB) infection. As disease severity seems to be crucial in the detection of this phenomenon, we decided to assess and compare endotoxin exposure in those patients representing the critical situation: septic shock and cardiogenic shock. Design Prospective, observational non intervention study. Setting Critical Care Department of a University tertiary hospital. Patients Cardiogenic shock (CS) and septic shock (SS) patients. Interventions None. Measurements and main results Follow-up was performed for the first three days. Inflammatory biomarkers (C-reactive protein, procalcitonin and interleuquin-6) and IgM antiendotoxin-core antibodies titter (IgM EndoCAb) were daily analyzed. Sixty-two patients were included; twenty-five patients with SS and thirty-seven with CS. Microbial etiology was established in 23 SS patients (92%) and GNB were present in 13 cases (52%). Although infection was suspected and even treated in 30 CS patients (81%), any episode could be finally confirmed. EndoCAb consumption was more intense in SS patients, although twenty-two CS patients (59.5%) had IgM anti-endotoxin value below 10th percentile range for healthy people. No statistically significant difference in endotoxin exposure was detected between Gram-positive and Gram-negative infections in the SS group. Endotoxin exposure ability to distinguish between SS and CS was moderate (AUC 0.7892, 95% IC: 0.6564–0.9218).Conclusions In the severely ill patient some mechanisms take place allowing endotoxin incursion and therefore blurring the limits of diseases pathophysiology. Our work representatively shows how exposure to endotoxin was not fully capable of distinguishing between CS and SS. (AU)

Objetivo En el paciente crítico se ha descrito una actividad incrementada de la endotoxina no asociada a infección por bacterias gramnegativas (BGN). La gravedad de la enfermedad influye en este fenómeno, por ello realizamos este estudio en el paciente crítico por antonomasia: shock séptico y cardiogénico. Diseño Estudio prospectivo, observacional, sin intervención.Lugar de estudioUnidad de Cuidados Intensivos. Pacientes Pacientes en shock cardiogénico (SC) o séptico (SS).Intervención Ninguna. Determinaciones y principales resultados Seguimiento durante los 3 primeros días. Proteína C reactiva, procalcitonina e interleucina-6, y el título de anticuerpos IgM anti-edotoxina (IgM EndoCAb) se analizaron diariamente. Se incluyó a 62 pacientes; 25 con SS y 37 con SC. La etiología fue identificada en 23 pacientes con SS (92%), los BGN estuvieron presentes en 13 casos (52%). Se sospechó e incluso trató la infección en 30 pacientes con SC, pero en ningún caso se pudo confirmar. El consumo de EndoCAb fue más intenso en los pacientes con SS, pero 22 pacientes con SC (59,5%) tuvieron unos valores por debajo del percentil 10. Los niveles de EndoCAb no fueron significativamente diferentes entre las infecciones por BGN y cocos grampositivos. La capacidad de EndoCab para diferenciar entre SC y SS resultó ser moderada (AUC 0,7892; IC del 95%, 0,6564-0,9218).Conclusiones En el paciente crítico es frecuente que la endotoxina provoque una respuesta inflamatoria y la sumación de distintos mecanismos fisiopatológicos. En este sentido, nuestro trabajo pone de manifiesto que la determinación de exposición a endotoxina no es totalmente capaz de distinguir entre los pacientes con SC y SS. (AU)

Anti-endotoxin antibodies consumption in cardiovascular collapse: Pathophysiological concerns.

OBJECTIVE: Abnormal endotoxin activity in critically ill patients has been described in the absence of Gram-negative bacterial (GNB) infection. As disease severity seems to be crucial in the detection of this phenomenon, we decided to assess and compare endotoxin exposure in those patients representing the critical situation: septic shock and cardiogenic shock. DESIGN: Prospective, observational non intervention study. SETTING: Critical Care Department of a University tertiary hospital. PATIENTS: Cardiogenic shock (CS) and septic shock (SS) patients. INTERVENTIONS: None. MEASUREMENTS AND MAIN RESULTS: Follow-up was performed for the first three days. Inflammatory biomarkers (C-reactive protein, procalcitonin and interleuquin-6) and IgM antiendotoxin-core antibodies titter (IgM EndoCAb) were daily analyzed. Sixty-two patients were included; twenty-five patients with SS and thirty-seven with CS. Microbial etiology was established in 23 SS patients (92%) and GNB were present in 13 cases (52%). Although infection was suspected and even treated in 30 CS patients (81%), any episode could be finally confirmed. EndoCAb consumption was more intense in SS patients, although twenty-two CS patients (59.5%) had IgM anti-endotoxin value below 10th percentile range for healthy people. No statistically significant difference in endotoxin exposure was detected between Gram-positive and Gram-negative infections in the SS group. Endotoxin exposure ability to distinguish between SS and CS was moderate (AUC 0.7892, 95% IC: 0.6564-0.9218). CONCLUSIONS: In the severely ill patient some mechanisms take place allowing endotoxin incursion and therefore blurring the limits of diseases pathophysiology. Our work representatively shows how exposure to endotoxin was not fully capable of distinguishing between CS and SS.

[Pathophysiology of septic shock]. / Fisiopatología del shock séptico.

Sepsis and septic shock result from an inadequate host response to an infection, which causes organ dysfunction. The progression of this condition is manifested by the occurrence of successive clinical stages, resulting from the systemic inflammatory response secondary to the activation of different inflammatory mediators, leading to organ dysfunction. There is a high burden of evidence on the role of endotoxin in the pathogenesis of sepsis and its crucial role in triggering the inflammatory response in sepsis caused by gram-negative bacteria. The coagulation cascade activation in sepsis patients is part of the host's adaptive immune response to infection. The endothelium is the main target in sepsis, which is metabolically active and can.

A Protocol to Perform Systemic Lipopolysacharide (LPS) Challenge in Rats / Protocolo para realizar reto sistémico con lipopolisacárido (LPS) en ratas

Abstract 19. Lipopolysaccharide (LPS) is a component of the outer membrane of Gram-negative bacteria. In animals, intraperitoneal administration of LPS, stimulates innate immunity and the production of proinflammatory cytokines. LPS provides an inflammatory stimulus that activates the neuroimmune and neuroendocrine systems resulting in a set of responses termed sickness behavior. The purpose of this protocol is to describe step-by-step the preparation and procedure of application of intraperitoneal injection of LPS in rats, as a guide for those researchers that want to use this assay to mount an inflammatory response. LPS intraperitoneal challenge in rats has been widely used to evaluate antiinflammatory reagents and to address basic scientific questions.

Resumen 23. El lipopolisacárido (LPS) es un componente de la membrana externa de las bacterias Gram negativas. En animales, la administración intraperitoneal de LPS estimula la inmunidad innata y la producción de citoquinas proinflamatorias. El LPS proporciona un estímulo inflamatorio que activa el sistema neuroinmunológico y el sistema neuroendocrino, lo que da como resultado un conjunto de respuestas denominadas conductas de enfermedad. El propósito de este protocolo es describir paso a paso la preparación y el procedimiento de aplicación de la inyección intraperitoneal de LPS en ratas, como una guía para aquellos investigadores que desean utilizar este método para estimular una respuesta inflamatoria en el animal. La estimulación con LPS en ratas, aplicada intraperitonealmente, se ha utilizado ampliamente para evaluar reactivos antiinflamatorios y para abordar preguntas básicas de investigación científica.

Avaliação do Teste de Ativação de Monócitos (MAT) para a detecção de pirógenos em Vacina Zika Inativada experimental

Injectable products including vaccines must be safe and pyrogen free. Pyrogens are molecules that once recognized by immune system can result in inflammatory responses of IL-1β e IL-6 cytokines release, leading to fever. In order to reduce number of laboratory animals, this study aimed to evaluate Monocyte Activation Test (MAT) efficiency at pyrogen detection in Zika Vaccine. The test was performed with PyroDetect System Merck Millipore, according supplier instructions. Zika vaccine was tested pure and diluted at 1/10, 1/20 and 1/40. Pyrogen recovery was tested by using spiked and non-spiked samples. After incubation with human cryopreserved blood Cryoblood® 16-18h, 37°C and CO2 5%, the incubation mixture blood and samples was collected to quantify IL-1β levels by ELISA. The results indicate low cytokine levels at tested samples, including spiked samples. This suggests vaccine had some interferers that might hinder the monocytes response. Furthermore, standard curves resulted lower absorbance values than expected, which would lead to misestimated endotoxin concentration in the samples. To assess test accuracy the calculated endotoxin recovery must be between 80 and 120% of spiked endotoxin. The results demonstrated variable recovery to same endotoxin concentration. We concluded this test seemed instable and it did not comply with accuracy and reproducibility parameters, for Zika Vaccine in the tested condition.

As vacinas, bem como todas as formulações injetáveis para uso humano, devem ser seguras e livres de pirogênio. Os pirógenos podem ser descritos como substâncias que, quando reconhecidas pelo sistema imune inato, desencadeiam respostas inflamatórias que resultam na liberação de citocinas, como IL-1β e IL-6, e podem ocasionar diversos sintomas, entre eles a febre. Com o intuito de substituir o uso de coelhos, esse estudo buscou verificar a eficiência do Teste de Ativação de Monócitos (MAT) para sua validação analítica na detecção de pirógenos, lipopolissacarídeos (LPS) e ácido lipoteicóico (LTA), no concentrado da Vacina Zika Inativada através da quantificação do mediador inflamatório IL-1β. Para isso, foi utilizado o PyroDetect System Merck Millipore, seguindo as orientações do fabricante. O concentrado da vacina Zika foi testado puro e em diluições de 1/10, 1/20 e 1/40, com e sem a contaminação por LPS ou LTA. As amostras foram incubadas com sangue humano criopreservado Cryoblood® – Kit PyroDetect por 16-18h a 37oC e, em seguida, foi realizado um ensaio de ELISA para quantificar os níveis de IL-1β liberados no sobrenadante. Os resultados dos testes indicaram baixos níveis de detecção de IL-1β nas diluições testadas, inclusive nas amostras que foram contaminadas por endotoxina. Esses resultados sugerem que a vacina Zika possa ter algum componente que cause interferência no teste. Além disso, verificou-se menor liberação de IL-1β nos ensaios do que o esperado, o que poderia levar a resultados superestimados da concentração de endotoxina nas amostras. Para determinar a exatidão do teste, foram calculadas as taxas de recuperação de endotoxina para cada ensaio, e estas deveriam estar em uma faixa entre 80 e 120% para a validação. No entanto, os resultados demonstraram taxas de recuperação fora da faixa esperada. Sendo assim, concluímos que os parâmetros de exatidão, precisão e reprodutibilidade não foram atingidos para a Vacina Zika nas condições testadas.

Aplicabilidade de métodos alternativos no monitoramento da qualidade microbiológica da água tratada para diálise / Applicability of alternative methods for the monitoring microbiological quality of treated water for dialysis

A fim de garantir a qualidade final de produtos os laboratórios de análise microbiológica fornecem dados sobre a qualidade dos mesmos em todas as suas etapas de produção. A crescente preocupação com a saúde dos pacientes conduz à busca de métodos que forneçam resultados precisos e rápidos, pois possibilitam que ações corretivas sejam tomadas em tempo real. O presente trabalho teve por objetivo avaliar o potencial de tecnologia alternativa no monitoramento de endotoxina bacteriana na água tratada para diálise e dialisato e avaliar o potencial da citometria de fluxo na análise de água. Para isso utilizou-se Portable Test System (PTS®) como método alternativo para detecção de endotoxina bacteriana no monitoramento da água tratada para diálise e dialisato, o qual foi validado frente ao método convencional farmacopeico. Paralelamente realizou-se revisão narrativa da literatura a fim de avaliar a aplicabilidade da citometria de fluxo em análises de água. A análise dos diferentes parâmetros de validação para endotoxina bacteriana no método alternativo mostrou que, exceto para a menor diluição analisada, houve linearidade e precisão nos resultados. Por outro lado a concentração de 0,25 UE/mL foi a menor que apresentou exatidão e especificidade. Observou-se ainda, que o limite de detecção foi de 0,125UE/mL e o de quantificação de 0,25 UE/mL, portanto o intervalo foi de 0,25-1,0 UE/mL. Adicionalmente pela análise de resistência pode-se perceber que ao variar analistas não houve diferença significativa. Em relação ao tempo de análise em uma condição de rotina laboratorial com muitas amostras, o PTS® mostrou-se demorado. Ressalta ainda, que seria importante que a legislação vigente determinasse a análise mensal de endotoxinas no dialisato. A revisão da literatura evidencia o potencial da tecnologia de citometria de fluxo, pois a mesma mostrou-se satisfatória quando comparada a metodologias convencionais para análise de água. O trabalho desenvolvido permitiu concluir que o PTS®) mostrou-se adequado para analisar amostras in loco, permitindo análises em tempo real, que para as quais haja a expectativa de ausência de endotoxinas ou de concentração respeitando o intervalo de 0,25 UE/mL a 1,0 UE/mL. Quanto a citometria de fluxo, esta mostrou-se uma tecnologia promissora em analisar amostras de água, sendo portanto recomendável proceder a estudos de validação e aplicabilidade

In order to guarantee the final quality of products, the microbiological analysis laboratories provide data about their quality at all production stages. The growing concern for patients' health leads to the search for methods that provide accurate and fast results, as they enable corrective actions to be taken in real time. The present work aimed to evaluate the alternative technology potential in the monitoring of bacterial endotoxin in treated water for dialysis and dialysate and to evaluate the potential of flow cytometry in water analysis. The different validation parameters analysis for bacterial endotoxin in alternative method showed that, except for the lowest dilution analyzed, there was linearity and precision in the results. On the other hand, the concentration of 0.25 EU / mL was the lowest that presented accuracy and specificity. It was further observed that the detection limit was 0.125UE / mL and the quantification limit was 0.25 EU / mL, so the range was 0.25-1.0 EU / mL. Additionally by the ruggedness analysis it was possible to perceived that when varying analysts there was no significant difference. Regarding the analysis time in a laboratory routine condition with many samples, the PTS® was was time consuming. It was also observed that it would be important to determine monthly analysis of endotoxins in dialysate. The literature review evidence the flow cytometry technology potential of the because it was satisfactory when compared to conventional methodologies for water analysis. The research showed that the PTS® was suitable for analyzing samples in loco, allowing real-time analyzes, for which there is expectation of endotoxins absence or concentration respecting the range of 0.25 EU / mL to 1.0 EU / mL. For the flow cytometry, it was shown to be a promising technology for analyzing water samples, and it is therefore advisable to carry out validation and applicability studies

Validação de metodologia analítica para determinação de endotoxina bacteriana em água para diálise por meio de método cromogênico cinético / Analytical methodology validation for determining the bacterialendotoxin in the dialysis water by means of kinetic chromogenic technique

O nível de endotoxina presente na água tratada para hemodiálise é um importante indicador dequalidade, uma vez que altas concentrações de endotoxina atuam como a principal fonte de inflamaçãocrônica em pacientes submetidos à diálise. Este estudo visa validar o método analítico para determinarquantitativamente a endotoxina bacteriana em amostras de água de hemodiálise pelo métodocromogênico cinético e de comparar com o método de coagulação em gel. Os ensaios pelo métodode coagulação em gel foram realizados de acordo com a Farmacopeia Brasileira em três amostrasde água de hemodiálise. A validação do método cromogênico cinético foi realizada utilizando-se asmesmas amostras por meio de sistema de teste portátil. As médias geométricas das concentrações dospontos finais obtidos nos testes de confirmação de sensibilidade LAL e de interferência por métodode coagulação em gel apresentaram resultado de 0,125 UE/mL. Os resultados obtidos pelo métodocromogênico para a recuperação do controle positivo do produto variaram de 89 a 186% e o coeficientede variação de 2,5 a 18,2%, demonstrando que as amostras não apresentaram interferência. Foramobtidos resultados equivalentes em ambos os métodos, o que permite a implementação do método emlaboratórios de saúde pública.

The occurrence of endotoxin in the treated water for hemodialysis is an important indicator of quality,since high concentrations of endotoxin constitute the main source for causing chronic inflammationin patients undergoing dialysis. This study aims at validating the analytical method for determiningquantitatively the bacterial endotoxin in hemodialysis water samples. The data from the kineticchromogenic method were compared with the results obtained from the gel coagulation technique.The gel coagulation assays were performed in three samples of hemodialysis water, according to theBrazilian Pharmacopoeia. The validation of the kinetic chromogenic method was performed usingthe same samples through the portable test system. The geometric means of the concentrations ofthe endpoints obtained from the tests for confirming the LAL sensitivity and the interference by gelcoagulation method showed a result of 0.125 EU/mL. The results obtained by the chromogenic methodfor recovering the product positive control varied from 89 to 186% and the coefficient of variationfrom 2.5 to 18.2%, demonstrating that the samples did not show interference. Equivalent results wereobtained in both methods, therefore being viable the implementation of this methodology in the publichealth laboratories.

Validação de metodologia analítica para determinação de endotoxina bacteriana em água para diálise por meio de método cromogênico cinético / Analytical methodology validation for determining the bacterial endotoxin in the dialysis water by means of kinetic chromogenic technique

O nível de endotoxina presente na água tratada para hemodiálise é um importante indicador de qualidade, uma vez que altas concentrações de endotoxina atuam como a principal fonte de inflamação crônica em pacientes submetidos à diálise. Este estudo visa validar o método analítico para determinar quantitativamente a endotoxina bacteriana em amostras de água de hemodiálise pelo método cromogênico cinético e de comparar com o método de coagulação em gel. Os ensaios pelo método de coagulação em gel foram realizados de acordo com a Farmacopeia Brasileira em três amostras de água de hemodiálise. A validação do método cromogênico cinético foi realizada utilizando-se as mesmas amostras por meio de sistema de teste portátil. As médias geométricas das concentrações dos pontos finais obtidos nos testes de confirmação de sensibilidade LAL e de interferência por método de coagulação em gel apresentaram resultado de 0,125 UE/mL. Os resultados obtidos pelo método cromogênico para a recuperação do controle positivo do produto variaram de 89 a 186% e o coeficiente de variação de 2,5 a 18,2%, demonstrando que as amostras não apresentaram interferência. Foram obtidos resultados equivalentes em ambos os métodos, o que permite a implementação do método em laboratórios de saúde pública.

The occurrence of endotoxin in the treated water for hemodialysis is an important indicator of quality, since high concentrations of endotoxin constitute the main source for causing chronic inflammation in patients undergoing dialysis. This study aims at validating the analytical method for determining quantitatively the bacterial endotoxin in hemodialysis water samples. The data from the kinetic chromogenic method were compared with the results obtained from the gel coagulation technique. The gel coagulation assays were performed in three samples of hemodialysis water, according to the Brazilian Pharmacopoeia. The validation of the kinetic chromogenic method was performed using the same samples through the portable test system. The geometric means of the concentrations of the endpoints obtained from the tests for confirming the LAL sensitivity and the interference by gel coagulation method showed a result of 0.125 EU/mL. The results obtained by the chromogenic method for recovering the product positive control varied from 89 to 186% and the coefficient of variation from 2.5 to 18.2%, demonstrating that the samples did not show interference. Equivalent results were obtained in both methods, therefore being viable the implementation of this methodology in the public health laboratories.

Clinical and hematological changes in sheep induced by Escherichia coli lipopolysaccharide / alterações clínicas e hematológicas induzidas pela administração de lipopolisscarídeo de Escherichia coli em ovelhas / Alteraciones clínicas y hematológicas inducidas por la administración de lipopoliscárido de Escherichia coli en ovejas

Organic response to infection is characterized by a systemic reaction known as acute phase response (APR). In order to know the effect of the administration of Escherichia coli lipopolysaccharide (LPS) on physiological, hematological and biochemical variables, 10 sheep weighing 45 ± 5 kg were divided in two groups: Experimental group treated with 3 doses of 1 µg.kg-1 LPS and control group treated with saline solution (SS) at the same frequency as experimental group. Body temperature (BT°), heart rate (HR) and respiratory rate (RR) were monitored. Blood samples for hemogram and enzyme activity for aspartate amino transferase (AST) and gamma glutamyl transferase (GGT) were collected between 1 and 24 h post-LPS. LPS-treated sheep presented mean values of BT (41.2 ± 0.4°C), HR (132 ± 12.3 beats/min) and RR (107.2 ± 25 cycles/min) higher than those observed in control sheep (39.8 ± 0.2°C, 88.8 ± 8.7 beats/min and 53.6 ± 17.1 cycles/min respectively). Between 4 and 8 hours post-injection (hpi) of LPS the leukocyte count was associated with lymphopenia, followed by leukocytosis at 24 hours. No changes were observed in the activity of AST and GGT enzymes. The results characterize APR induced by LPS in sheep, representing a useful model to study cardiovascular, hematological and biochemical responses to infection. (AU)

A resposta orgânica à infecção é caracterizada por uma reação sistêmica conhecida como resposta de fase aguda (RFA). Para conhecer o efeito da administração de lipopolissacárideo (LPS) de Escherichia coli sobre as variáveis fisiológicas, hematológicas e bioquímicas, 10 carneiros pesando 45 ± 5 kg foram divididos em dois grupos: o grupo experimental tratado com três doses de 1 µg.kg -1 de LPS e grupo controle tratado com solução salina (SS) na mesma frequência que o grupo experimental. Temperatura corporal (T°C), frequência cardíaca (FC) e frequência respiratória (FR) foram monitoradas. As amostras de sangue foram tomadas para hemograma e atividade da enzima aspartato aminotransferase (AST) e gama- -glutamiltransferase (GGT) entre uma e 24 h pós-LPS. Ovelhas tratadas com LPS apresentaram valores médios de T°C (41,2 ± 0,4°C), FC (132 ± 12,3 batimentos/min) e FR (107,2 ± 25 ciclos/min) acima dos observados em ovelhas do tratamento controle (39,8 ± 0,2°C, 88,8 ± 8,7 batimentos/min e 53,6 ± 17,1 ciclos/min, respectivamente). Entre 4 e 8 horas após a injeção de LPS, a contagem de leucocitos foi asociado com linfopenia, seguida de leucocitose as 24 horas. Nenhuma mudança na atividade das enzimas AST e GGT foi observada. Os resultados caracterizam uma resposta de fase aguda induzida por LPS em ovelhas, o que representa um modelo útil para estudar os sistemas cardiovascular, hematológico e bioquímico em resposta à infecção.(AU)

La respuesta orgánica a la infección se caracteriza por una reacción sistémica conocida como respuesta de fase aguda (RFA). Para conocer el efecto de la administración de lipopolisacárido (LPS) de Escherichia coli sobre las variables fisiológicas, hematológicas y bioquímicas, 10 ovejas con un peso de 45 ± 5 kg se dividieron en dos grupos: grupo experimental tratado con 3 dosis de 1 µg.kg-1de LPS y grupo control tratado con solución salina (SS) en la misma frecuencia que el grupo experimental. Temperatura corporal (T°C), frecuencia cardíaca (FC) y frecuencia respiratoria (FR) fueron monitoreadas. Se tomaron muestras de sangre para hemograma y actividad enzimática para el aspartato amino transferasa (AST) y gamma glutamil transferasa (GGT) entre 1 y 24 h post-LPS. Las ovejas tratadas con LPS presentaron valores medios de T°C (41.2 ± 0.4°C), FC (132 ± 12.3 latidos / min) y FR (107.2 ± 25 ciclos/min) por encima de los observados en ovinos controles (39.8 ± 0.2°C, 88.8 ± 8.7 latidos/min y 53.6 ± 17.1 ciclos/min respectivamente). Entre las 4 y 8 horas después de la inyección de LPS, el recuento de leucocitos se asoció a linfopenia, seguida de leucocitosis a las 24 horas. No se observaron cambios en la actividad de las enzimas AST y GGT. Los resultados caracterizan una respuesta de fase aguda inducida por LPS en ovinos, representando un modelo útil para estudiar los sistemas cardiovascular, hematológico y bioquímico en respuesta a la infección.(AU)

Avaliação clínica do efeito de diferentes medicações intracanais nos níveis de resolvinas e lipoxinas periapicais: novas perspectivas endodônticas / Clinical evaluation of the effect of different intracanal medications on levels of periapical resolvins and lipoxins: new endodontic perspectives

RESUMO O objetivo do estudo foi avaliar o efeito da terapia endodôntica utilizando NaOCl 2,5% e medicações intracanais a base de hidróxido de cálcio e de da Nacetil cisteína (NAC) na desinfecção dos canais radiculares, na redução de endotoxinas e na estimulação de liberação dos mediadores lipídicos Resolvina E1, D2 (RvE1, RvD2) e Lipxina A4 (LxA4). Foram selecionados quarenta dentes unirradiculares, com infecção endodôntica primária e periodontite apical. Os dentes foram aleatoriamente divididos em 3 grupos de acordo com a medicação intracanal a ser utilizada: G1: soro fisiológico + Ca(OH)2 (n=14),G2: N-Acetil Cisteína (n=13), G3: clorexidina (CLX) + Ca(OH)2 (n=14). Amostras bacterianas e de endotoxinas foram coletadas do canal radicular, após abertura coronária, após preparo dos canais com limas reciprocantes (Reciproc) selecionadas de acordo com o diâmetro do canal radicular e a solução irrigante (NaOCl 2,5%) e após medicação intracanal. A análise da atividade antimicrobiana foi através da contagem de unidades formadoras de colônias (UFC/mL) de microrganismos remanescentes no canal radicular e quantificação de endotoxinas (EU/mL) através do teste Limulus Amebocyte Lysate ­ LAL. Após o preparo biomecânico (PBM) os dentes foram preenchidos com as medicações intracanais de acordo com os grupos por quatorze dias. O fluído intersticial foi coletado após preparo dos canais e após 14 dias de medicação e a quantificação dos mediadores lipídicos (RvE1, RvD2, LxA4) foi realizada através do teste imunoenzimático (ELISA). Os valores obtidos foram tabulados, analisados pelo software GraphPad Prism 6.01 e submetidos aos testes de normalidade de Kolmogorov-Smirnov e Lilliefors e em seguida aos testes Kruskal-Wallis e Dunn e Anova one-way e Tukey (P <0.05). Para carga microbiana, o PBM reduziu em média 96% dos microrganismos aeróbios e 92,5% dos anaeróbios em todos os grupos (p<0,05). A utilização de medicação intracanal à base de Ca(OH)2 manteve os níveis atingidos com o PBM (p>0,05), porém no grupo NAC houve aumento de bactérias. Os níveis de endotoxinas diminuíram após o preparo dos canais e o uso das medicações reduziu o nível de endotoxinas porém sem diferença estatística em relação à redução alcançada com o preparo biomecânico. Quanto aos mediadores lipídicos, somente no grupo NAC foi observado aumento de Rv D2. Concluiu-se que o PBM reduziu significantemente o número de bactérias e a quantidade de endotoxinas do canal, e as medicações à base de Ca(OH)2 foram eficientes na eliminação de microrganismos do canal, entretanto NAC não foi eficaz para a redução da carga microbiana; As três medicações avaliadas foram capazes de atuar no LPS bacteriano. Somente a NAC foi capaz de influenciar positivamente esse resultado com o aumento de RvD2 pós 14 dias da medicação. Os mediadores lipídicos têm grande potencial para uso nos diversos tipos de tratamento endodôntico(AU)

ABSTRACT The aim of this study was to evaluate the effect of endodontic therapy using 2.5% NaOCl and intracane medications based on calcium hydroxide and Nacetyl cysteine (NAC) on root canal disinfection, reduction of endotoxins and stimulation of release of the lipid mediators Resolvin E1, D2 (RvE1, RvD2) and Lipoxin A4 (LxA4). Forty uniradicular teeth were selected, with primary endodontic infection and apical periodontitis. The teeth were randomly divided into 3 groups according to the intracanal medication to be used: G1: saline + Ca (OH) 2 (n = 14), G2: N-Acetyl Cysteine (n = 13), G3: chlorhexidine CLX) + Ca (OH) 2 (n = 14). Bacterial and endotoxin samples were collected from the root canal after coronary opening after preparation of the channels with reciprocal files (Reciproc) selected according to the root canal diameter and the irrigating solution (NaOCl 2.5%) and after intracanal medication. The analysis of the antimicrobial activity was by count of colony forming units (CFU / mL) of microorganisms remaining in the root canal and quantification of endotoxins (EU / mL) using the Limulus Amebocyte Lysate - LAL test. After biomechanical preparation (PBM) the teeth were filled with intracanal medications according to the groups for fourteen days. The interstitial fluid was collected after preparation of the channels and after 14 days of medication and quantification of the lipid mediators (RvE1, RvD2, LxA4) was performed through the enzymelinked immunosorbent assay (ELISA). The values obtained were tabulated, analyzed by GraphPad Prism 6.01 software and submitted to Kolmogorov Smirnov and Lilliefors normality tests, followed by Kruskal-Wallis and Dunn and Anova one-way and Tukey tests (P <0.05). For microbial load, PBM reduced on average 96% of aerobic microorganisms and 92.5% of anaerobes in all groups (p <0.05). The use of intracanal medication based on Ca (OH) 2 maintained levels reached with PBM (p> 0.05), but in the NAC group there was an increase of bacteria. The endotoxin levels decreased after the preparation of the canals and the use of the medications reduced the endotoxin level, but without statistical difference in relation to the reduction achieved with the biomechanical preparation. As for the lipid mediators, only in the NAC group an increase of D2 Rv was observed. It was concluded that PBM significantly reduced the number of bacteria and the amount of endotoxins in the canal, and Ca (OH) 2-based medications were efficient in the elimination of microorganisms from the canal, however NAC was not effective for reducing the load microbial; The three medications evaluated were able to act on bacterial LPS. Only the NAC was able to positively influence this result with the increase of RvD2 after 14 days of the medication. Lipid mediators have great potential for use in various types of endodontic treatment(AU)

Endotoxinas nas infecções endodônticas: revisão sistemática com metanálise e ensaio clínico randomizado / Endotoxins in endodontic infection: a systematic review with metaanalysis and a clinical trial

Sabe-se que as endotoxinas provenientes das bactérias grã-negativas desempenham um importante papel nas infecções endodônticas se relacionando à sinais e sintomas clínicos/radiográficos. Sendo assim, a redução ou eliminação de endotoxinas é fundamental para a resolução da inflamação periapical. Os objetivos do presente estudo foram: Artigo 1 - realizar uma revisão sistemática com metanálise com o intuito de avaliar a relação entre níveis de endotoxinas e a presença de sinais e sintomas clínicos, bem como de sinais radiográficos em pacientes com infecção endodôntica primária; Artigo 2 - fazer um ensaio clínico randomizado para avaliarmos estratégias clínicas para otimizar a eliminação microbianana e de lipopolissacarídeos (LPS) utilizando a Terapia Fotodinâmica (PDT) como tratamento suplementar ao PQM nas modalidades de terapia endodôntica em única e múltiplas sessões. Métodos: Artigo 1 - para a revisão sistemática uma busca eletrônica foi realizada por dois autores, no idioma inglês, nas bases de dados Medline/PubMed, Embase, Cochrane Library, Scielo, Science Direct, Web of Knowledge e Scopus. Após seleção dos artigos foi realizado uma metanálise com análises de sinais e sintomas clínicos/radiográficos. Artigo 2 - Selecionou-se 24 casos de dentes com infecção endodôntica primária que foram aleatoriamente divididos em 2 grupos (n=12): SU - sessão única e SM ­ sessão múltipla. Foram realizadas coletas microbiológica e de endotoxinas dos canais radiculares utilizando cone de papel estéril/ apirogênico em diferentes momentos operatórios. Foi realizado cultura microbiana para determinar a carga bacteriana em UFC/mL (Unidades Formadoras de Colônias/mL) e para quantificação de endotoxinas foi realizado o teste KQCL de "Lisado de Amebócito Limulus" (LAL). Resultados: Artigo 1 - A metanálise revelou que individuos com dor à percussão (TTP) (P=0,04; I2 57%) e episódio de dor prévio (PEP) (P=0,001; I2 81%) apresentaram maior nível de endotoxina que os casos que não apresentaram nenhum destes sintomas. O tamanho da área radiolucente (SRL) > 2 mm (P=0,02; I2 68%) e presença de exudação (EX) (P=0,0007; I2 0%) estavam associados com maior nível de endotoxinas. Artigo 2 - Para carga microbiana, a suplementação do tratamento em sessão única com PDT reduziu significativamente os níveis bacterianos (p<0,05), mas não nos casos de duas sessões (p>0,05). Para os níveis de endotoxinas, na sessão única e de duas sessões, não houve diferença significativa após uso de PDT (p>0,05). Foi possível concluir que Artigo 1 ­ A metanálise mostrou forte evidência que endotoxina está relacionada com a presence de sinais e sintomas clínicos/radiográficos em pacientes com infecção endodôntica. Artigo 2 - A terapia fotodinâmica melhorou o desempenho da desinfecção bacteriana dos canais radiculares em uma visita, mas não para a modadilidade de 2 visitas após uso de medicação à base de Ca(OH)2. PDT não foi efetivo contra endotoxinas(AU)

Endotoxins originating from gram negatives bacterias are related to signals and clinical/radiographic symptoms. Therefore, reduction or elimination of endotoxins is essential to solve periapical inflammation. The aim of this dissertation was: Article 1 - To relate endotoxin levels and presence of clinical signs/symptoms and radiographic features in endodontic infection. Article 2 - To evaluate the effectiveness of supplemental photodynamic therapy (PDT) in optimizing the removal of bacteria and endotoxins from primarily infected root canals after one-visit and twovisit treatments. Methodology: Article 1 - Electronic searches were performed on Medline/PubMed, Embase, Cochrane Library, Scielo, Science Direct, Web of Knowledge and Scopus databases for identification of relevant studies published up to July 2016. Only reports in English were included. The selected literature was reviewed by two authors and classified as either suitable or unsuitable for inclusion in this review. The relationship between endotoxin levels and presence of clinical signs/symptoms and radiographic features were determined. Additionally, a metaanalysis was performed. Article 2 - 24 primarily infected root canals with apical periodontitis were selected and randomly divided into one-visit (n=12) and two-visit (n=12). Samples were collected before and after root canal procedures. Endotoxins were quantified by chromogenic limulus amebocyte lysate assay. Culture techniques were used to determine bacterial colony-forming unit counts. The systematic review and meta-analysis aimed to evaluate the relationship between endotoxin levels and presence of clinical signs/symptoms and radiographic features in patients with endodontic infection. Results: Article 1 - Among the 285 articles identified in the initial search, 29 were included for full-text appraisal and only eight studies met the inclusion criteria for this systematic review. Meta-analysis revealed that individuals having teeth with tenderness to percussion (TTP) (P=0.04; I2 57%) and previous episode of pain (PEP) (P=0.001; I2 81%) had higher levels of endotoxin than their counterparts. Size of radiographic lesion (SRL) > 2 mm (P=0.02; I2 68%) and presence of root canal exudation (EX) (P=0.0007; I2 0%) were associated with higher levels of endotoxin. Article 2 - Bacteria and endotoxins were detected in 100% of the initial samples, with median values of 1.97 x 105 CFU/mL and 24.983 EU/mL, respectively. The CMP using single-file reciprocating technique was effective in the reduction of bacteria and endotoxins (All, p < .05). The supplemental PDT was effective in reducing bacterial load in the one-visit (p < .05) but not in the two-visit treatment after use of Ca(OH)2 medication for 14 days (p>.05). In the two-visit group, after 14 days of inter- appointment medication with Ca(OH)2, a significant reduction in the median levels of endotoxins was found in comparison to CMP alone (from 1.041 to 0.094 EU/mL)(p < .05). Despite the type of treatment, the supplemental PDT was not effective against endotoxins (p>.05). Conclusion: Article 1 - This meta-analysis provides strong evidence that endotoxin are related with the presence of clinical signs/symptoms and radiographic features in patients with endodontic infection. Article 2 - The photodynamic therapy optimized the disinfection of bacteria from root canals in one-visit but not for two visit treatment modality with the accomplishment of calcium hydroxide medication. Thus, PDT is not effective against endotoxins(AU)

Influência da dieta na endotoxemia metabólica / Influence of diet on metabolic endotoxemia

O lipopolissacarídeo (LPS) pode desempenhar um papel importante no desenvolvimento de doenças crônicas, tais como obesidade e diabetes. Essa endotoxina é capaz de se ligar ao Toll-like receptor (TLR-4) presente na membrana plasmática de diferentes tipos celulares, que por sua vez desencadeia diversas vias de sinalização. Essas vias quando ativadas podem acarretar inflamação, induzindo resistência insulínica por meio de distintos mecanismos. A dieta pode desempenhar um papel importante no desenvolvimento da endotoxemia. Entre os fatores dietéticos, a ingestão excessiva de lipídio tem se destacado. Outros compostos, tais como probióticos, prebióticos, flavonoides e frutose também podem influenciar o LPS circulante. Assim, o objetivo desta revisão é integrar o novo conhecimento referente às interações entre nutrientes e endotoxemia metabólica.

Estudo da diversidade microbiana e níveis de endotoxinas em lesões endo-periodontais / Study of microbiology diversity and endotoxin levels in endoperiodontal lesions

A lesão endo-periodontal é caracterizada pela associação da doença endodôntica e periodontal no mesmo elemento dentário. A evolução dessa lesão ocorre pela infecção por microrganismos, na sua grande maioria gram-negativas anaeróbias. O presente estudo teve como objetivo, identificar os microrganismos presentes em lesões endo-periodontais pelo método do DNA-DNA checkerboard hybridization, avaliar os níveis de endotoxinas pelo ensaio LAL e correlacionar com sinais e sintomas clínicos de pacientes com lesões endo-periodontais. Dez pacientes com lesões endo-periodontais foram selecionados do ICT-UNESP, foram coletadas 10 amostras endodônticas e 10 periodontais, as amostras foram armazenadas e posteriormente realizado os ensaios laboratoriais(LAL para endotoxinas e Checkerboard para microbiológico). Os resultados mostraram maiores níveis de endotoxinas na bolsa periodontal com média e desvio padrão de 39096 ± 39312. A média e desvio padrão dos valores de endotoxinas no canal radicular foram 3240 ± 4001 (significativamente menores p = 0,002). O teste de correlação de Pearson mostrou correlação moderada, com p = 0,084. A espécie P. nigrescens foi associada com a microbiota periodontal (p = 0,0198) enquanto na microbiota endodôntica as espécies E. faecium(p =0,0031), P. acnes(p= 0,0325), G. morbillorum(p=0,0108), C. sputigena(p = 0,0031) e L. buccalis(p = 0,0055), foram fortemente relacionadas. Os microrganismos P. intermedia, V parvula e P. endodalis tiveram pequena correlação quando associadas as microbiotas endodônticas e periodontais. O estudo concluiu que a bolsa periodontal apresenta maiores níveis de endotoxinas em relação ao canal radicular. O estudo sugere que a microbiota das lesões endo-periodontais parece a mesma presente em lesões endodônticas e periodontais separadamentes. No entanto,devido a sua grande prevalência, o complexo laranja parece exercer um papel importante neste tipo de lesão

The endo-periodontal lesion is characterized by the association of endodontic and periodontal disease in the same tooth. The evolution of this lesion occurs by the presence of microorganisms with vast majority gram-negative anaerobes. Therefore this study aims to identify the microorganisms in endo-periodontal lesions by DNA-DNA checkerboard hybridization method, evaluate and compare the levels of endotoxins with clinical signs and symptoms. 10 teeth with endo-periodontal lesions in agree with the inclusion criteria were selected from patients in the ICT-UNESP, 10 endodontic and 10 periodontal samples were collected, stored and subsequently performed the laboratory assays. The results showed higher levels of endotoxin in periodontal pockets with mean and standard deviation of 39096 ± 39312. The mean and standard deviation values of endotoxins in root canals were 3240 ± 4001 (significantly lower p = 0.002). The Pearson correlation test showed moderate correlation, with p = 0.084. P. nigrescens species was associated with periodontal microflora (p = 0.0198) whereas in endodontic microbiota the species E. faecium (p = 0.0031), P. acnes (p = 0.0325), G. morbillorum (p = 0.0108) C. sputigena (p = 0.0031) and L. buccalis (p = 0.0055) were strongly correlated. The species P. intermedia, V parvula and P. endodontalis showed low correlation in endo-periodontal microflora. The study concluded that the periodontal pocket has higher levels of endotoxins in relation to the root canal. The microbiota of endo-periodontal lesions seems to be almost the same in their infections separated. The study suggests that the orange complex must play an important role in this type of infection

Preferential protection of domains II and III of bacillus thuringiensis cry1Aa toxin by brush border membrane vesicles / Protección preferencial de los dominios II y III de la toxina cry1Aa de bacillus thuringiensis en vesículas de membrana de borde de cepillo

The surface exposed Leucine 371 on loop 2 of domain II, in Cry1Aa toxin, was mutated to Lysine to generate the trypsin-sensitive mutant, L371K. Upon trypsin digestion L371K is cleaved into approximately 37 and 26 kDa fragments. These are separable on SDS-PAGE, but remain as a single molecule of 65 kDa upon purification by liquid chromatography. The larger fragment is domain I and a portion of domain II (amino acid residues 1 to 371). The smaller 26-kDa polypeptide is the remainder of domain II and domain III (amino acids 372 to 609). When the mutant toxin was treated with high dose of M. sexta gut juice both fragments were degraded. However, when incubated with M. sexta BBMV, the 26 kDa fragment (domains II and III) was preferentially protected from gut juice proteases. As previously reported, wild type Cry1Aa toxin was also protected against degradation by gut juice proteases when incubated with M. sexta BBMV. On the contrary, when mouse BBMV was added to the reaction mixture neither Cry1Aa nor L371K toxins showed resistance to M. sexta gut juice proteases and were degraded. Since the whole Cry1Aa toxin and most of the domain II and domain III of L371K are protected from proteases in the presence of BBMV of the target insect, we suggest that the insertion of the toxin into the membrane is complex and involves all three domains.

La superficie de la toxina Cry1Aa, en el asa 2 del dominio II contiene expuesta la leucina 371, la cual fue modificada a lisina produciendo una mutante sensible a la tripsina, L371K. Esta mutante produce dos fragmentos de 37 y 26 kDa por acción de la tripsina que son separables por SDS-PAGE, pero que a la purificación por cromatografía líquida se mantienen como una sola molécula de 65 kDa. El fragmento grande contiene al dominio I y una parte del dominio II (aminoácidos 1 al 371). El polipéptido de 26 kDa contiene la parte restante del dominio II y dominio III (aminoácidos 372 al 609). Cuando la toxina mutante fue tratada con dosis altas de jugo intestinal de Manduca sexta, ambos fragmentos fueron degradados. Sin embargo, cuando fueron incubados en VMBC de M. sexta, el fragmento de 26 kDa fue protegido preferencialmente de las proteasas intestinales. Como se ha reportado, la toxina silvestre Cry1Aa también es protegida de la degradación de las proteasas cuando es incubada en VMBC de M. sexta. Sin embargo, cuando se adicionó VMBC de ratón a la mezcla de reacción, ni la toxina Cry1Aa ni la mutante L371K mostraron resistencia a las proteasas y fueron degradadas. Dado que la toxina completa de Cry1Aa y casi todo de los dominios II y III de L371K están protegidos de proteasas en presencia de VMBC del insecto, este estudio sugiere que la inserción de la toxina en la membrana involucra los tres dominios.

Influence of radiation on endotoxin test using the PTS TM for 18-FDG radiopharmaceutical / Influência da radiação sobre o teste de endotoxina usando o PTS TM para 18 radiofármaco FDG

F-18 FDG (2-[18-F] fluoro-2-deoxy-D-glucose) is the most frequently used radiopharmaceutical for PET and PET CT imaging exams. The FDA recently approved the use of the PTS TM (Portable Test System) as an alternative to the standard test proposed by the United States Pharmacopeia using the LAL (Limulus Amebocyte Lysates), that takes longer to perform (about 1h) than the PTS TM (15 min). Recent studies have demonstrated that radiation could interfere with the PTS TM test. In order to study the effects of radiation on the PTS TM test and/or equipment, 27 batches of F-18 FDG produced in the Nuclear Engineering Institute were analyzed. The results showed that no direct correlation with radiation was found in any of the cases.

O FDG-18 é o radiofármaco mais utilizado nos exames de PET e PET CT. O FDA recentemente aprovou o uso do PTS TM (Portable Test System) como método alternativo ao teste padrão de endotoxina, proposto pela Farmacopéia Americana, considerando que no primeiro há um tempo de espera de 1 hora frente a somente 15 minutos do segundo. Estudo recentes demonstram que a radiação poderia interferir no teste do PTS TM. De modo a avaliar os efeitos da radiação no teste PTS TM foram analisados 27 lotes de F-18 FDG produzidos no Instituto de Engenharia Nuclear. Os resultados demonstraram que em todos os casos nenhuma correlação direta com a radiação foi observada.

Endotoxin and cancer: [review] / Endotoxina e câncer: [revisão]

Exposure to endotoxin, a component of gram-negative bacterial cell walls, is widespread in many industrial settings and in the ambient environment. Heavy-exposure environments include livestock farms, cotton textile facilities, and saw mills. In this article, we review epidemiologic, clinical trial, and experimental studies pertinent to the hypothesis that endotoxin prevents cancer. Since the 1970s, epidemiologic studies of cotton textile and other endotoxin-exposed occupational groups have consistently demonstrated reduced lung cancer risks. Experimental animal toxicology research and some limited therapeutic trials in cancer patients offer additional support for an anticarcinogenic potential. The underlying biological mechanisms of anticarcinogenesis are not entirely understood but are thought to involve the recruitment and activation of immune cells and proinflammatory mediators (e.g., tumor necrosis factor α and interleukin-1 and - 6). In view of the current state of knowledge, it would be premature to recommend endotoxin as a cancer-chemopreventive agent. However, further epidemiologic and experimental investigations that can clarify further dose-effect and exposure-timing relations could have substantial public health and basic biomedical benefits.

A exposição à endotoxina, componente de paredes celulares bacterianas gram-negativas, é muito comum em plantas industriais e no meio ambiente. Ambientes de alta exposição incluem fazendas de criação de animais, instalações têxteis de algodão e moinhos. Neste artigo, revemos estudos experimentais, epidemiológicos e ensaios clínicos sobre a hipótese de que a endotoxina previne o câncer. Desde os anos 70, estudos epidemiológicos em têxteis de algodão e outros grupos ocupacionais expostos à endotoxina demonstram redução no risco de câncer de pulmão. Pesquisa experimental de toxicologia animal e ensaios terapêuticos limitados em pacientes com câncer dão suporte para um potencial anticarcinogênico. Os mecanismos biológicos anticarcinogênicos de base ainda não são completamente compreendidos, mas acredita-se que incluem recrutamento e ativação de células imunológicas e mediadores pró-inflamatórios (ex.: fator de necrose tumoral α e interleucina-1 e - 6). Devido ao estágio atual de conhecimento, seria prematuro recomendar a endotoxina como agente quimiopreventivo. Porém, pesquisas epidemiológicas e experimentais que esclareçam relações de dosagem-efeito e exposição-relações temporais podem trazer benefícios para a saúde pública e a biomedicina básica.

Análise dos contaminantes biológicos presentes no material particulado (PM2, 5) de amostras da região metropolitana de São Paulo / Analysis of biological contaminants in particulate matter (PM2.5) of Sao Paulo

INTRODUÇÃO: A poluição do ar traz diversos efeitos à saúde e, em particular, o material particulado menor do que 2,5 μm (PM2,5), está associado ao aumento das taxas de morbidade e mortalidade devido a doenças cardiorespiratórias. A maioria dos estudos foca apenas na composição química do material, porém os componentes do bioaerossol podem ser responsáveis por aproximadamente 22% da massa total. OBJETIVOS: Nesse estudo, objetivamos determinar a contribuição relativa de fungos e endotoxinas (constituinte da parede celular de bactérias gram-negativas) no PM2,5 e verificar possíveis efeitos inflamatórios locais devido à exposição a fungos e PM2,5 em ratos. MÉTODOS: O estudo foi dividido em três partes: 1) comparação de metodologias de coleta de fungos em amostradores de ar de curta e longa duração realizada em ambiente externo e em ambiente de concentrador de partículas ambientais em Boston, MA. 2) Coleta de 4 tipos de filtros a partir de amostrador de ar de PM2,5 utilizados para análise separadamente de fungos, quantificação de endotoxinas, análise de elementos químicos e extração para instilação em ratos em São Paulo. Dados meteorológicos também foram coletados. 3) Instilação intratraqueal de PM2,5 e fungos originários da atmosfera de São Paulo em ratos machos Wistar divididos em 3 grupos: A (administração de 6,3x102 esporos/μg de PM2.5), B (18x102 esporos/μg de PM2.5) e C (controle - instilação a partir de extração de filtro branco). O sacrifício foi feito após 24 horas da exposição, depois da retirada do lavado broncoalveolar para contagem total e diferencial de leucócitos, além de quantificação de citocinas de respostas TH1 e TH2. RESULTADOS: O estudo de comparação de metodologias mostrou que, entre os amostradores de ar de curta duração, Personal Burkard recuperou maior diversidade e concentração do que Andersen (p<0,05). Entre os amostradores de longa duração, Recording Burkard mostrou-se o melhor em termos de diversidade e concentração...

INTRODUCTION: It is well known that air pollution is associated with health effects, particularly, particulate matter (PM) is correlated with increment in morbity and mortality by cardiorespiratory diseases. A lot of studies have focused on chemical characterization of PM, although components of bioaerosols may comprise nearly 22% of the total mass. OBJECTIVES: The aims of this study were to determine the relative contribution of fungi and endotoxin (component of cell wall in gram-negative bacteria) in PM2.5 and verify acute local inflammatory response due to fungi and PM2.5 exposure in rats. METHODS: The study was divided in 3 parts: 1) Comparison among short and long term samplers located outdoor and in Ambient Particle Concentrator located in Boston, MA. 2) Sampling of 4 different filters types analyzed for fungi, endotoxin, chemical composition and extraction for instillation experiments in Sao Paulo. Meteorological data were also collected. 3) Intratracheal instillation of PM2.5 and fungi in male Wistar rats, divided in 3 groups: A (administration of 6.3x102 spores/μg of PM2.5), B (administration of 18x102 spores/μg of PM2.5) and C (control - blank filter). The animals were sacrificed 24 hours after exposure to collect bronchoalveolar lavage. Total and differential counts of leukocytes as TH1 and TH2 cytokines quantification were assessed. RESULTS: Sampling techniques comparisons showed that, the short term sampler Personal Burkard was able to collect more diversity and concentration of spores than Andersen sampler (p<0.05). The long term sampler Recording Burkard was also able to collect more diversity and concentration of spores than MCE filters (p<0.05). We also observed that fungi contribution to PM2.5 was relevant, representing up to 2159 spores/μg of PM2.5 in Ambient Particle Concentrator located in Boston, MA. The second part of the study demonstrated again that fungi represent a relevant portion of PM2.5, reaching average values of 1,345...

Peracute bovine mastitis caused by Klebsiella pneumoniae / Mastite bovina hiperaguda causada por Klebsiella pneumoniae

Relata-se a ocorrência de graves sintomas de mastite hiperaguda em vaca, causada por Klebsiella pneumoniae, na terceira semana de lactação. Descrevem-se aspectos epidemiológicos, sintomas clínicos, procedimentos de diagnóstico microbiológico, conduta terapêutica e medidas de controle.

THREE-DIMENSIONAL STRUCTURE OF Bacillus thuringiensis TOXINS: A REVIEW / Estructura tridimensional de las toxinas de Bacillus thuringiensis: revisión

Structure-based protein engineering of Bacillus thuringiensis d-endotoxins may direct the search for variants with broader susceptible species spectra, optimal potency, and stability properties. Here, we revised the more important characteristics of the Cry and Cyt proteins three-dimensional structure; it is possible to conclude that an obvious general model exists with specific properties according to its function and target organism.

La ingeniería de proteínas de las d-endotoxinas de Bacillus thuringiensis puede orientar la búsqueda de variantes con un espectro mayor de especies susceptibles, potencia optimizada, y estabilidad apropiada. Aquí, nosotros revisamos las características más importantes de la estructura tridimensional de las proteínas Cry y Cyt. Es posible concluir que existe un modelo general obvio con propiedades específicas de acuerdo a su función y organismo susceptible.